• 资源
  • 新闻
  • SCI成果
  • 技术文章
  • 促销
  • 产品说明书
  • FAQ
  • 公司
  • 关于我们
  • 人才招聘
  • 留言系统
  • 联系我们
  • 蛋白质组学

  • 蛋白相对定量
  • 蛋白修饰
  • RNA/蛋白-蛋白相互作用
  • 代谢组学

  • LC-MS
  • 外泌体组学

  • 外泌体样本处理
  • 外泌体转录组学
  • 外泌体蛋白质组学
  • 外泌体代谢组学
  • 产品
  • Arraystar产品/试剂

  • ncRNA PCR新宝6下载
  • mRNA PCR新宝6下载
  • 实时定量PCR试剂
  • Seq-Star™ NGS 测序试剂
  • 康成产品/试剂

  • 免疫印迹内参
  • 免疫印迹产品
  • 二级抗体
  • 资源
  • 新闻

  • 市场活动
  • 新服务/产品
  • SCI成果

  • lncRNA研究
  • circRNA研究
  • 表观遗传研究
  • Small RNA研究
  • 技术文章

  • lncRNA研究
  • circRNA研究
  • Small RNA研究
  • 表观转录组研究
  • 表观遗传研究
  • mRNA 研究
  • 蛋白研究
  • 促销

  • 2019
  • 2018
  • 2017
  • 产品说明书

  • Arraystar 实时定量PCR试剂
  • Arraystar PCR新宝6下载
  • Arraystar 测序试剂
  • FAQ

  • 转录组学
  • 表观基因组学
  • 公司
  • 关于我们

  • 人才招聘

  • 留言系统

  • 联系我们

  • 蛋白-蛋白相互作用

  • 简介
  • 原理
  • 案例展示
  • 样品要求
  •        蛋白质并非孤立存在的生物分子,而是具有特定三维空间结构并与其他蛋白质相互作用,共同执行功能。因此,蛋白质的模块及空间组织与其表达水平具有同样的重要性。为了解析蛋白质组的组织结构单元而开发的基于质谱的蛋白质组学方法通常结合了质谱检测与各种生化试验。其中最经典的技术为1999[1]首次报导的亲和纯化-质谱技术(affinity purification – mass spectrametry,AP-MS)。既可进行大规模的protein interactome 构建[2],也能针对特定条件下特定蛋白质的互作进行差异分析、时间动态分析等[3]。

    图1:AP-MS 技术的两种运用。


    参考文献

    [1]. Rigaut, G.; Shevchenko, A.; Rutz, B.; Wilm, M.; Mann, M.; Seraphin, B., A generic protein purification method for protein complex characterization and proteome exploration. Nature biotechnology 1999, 17 (10), 1030-2.
    [2]. Huttlin, E. L.; Ting, L.; Bruckner, R. J.; Gebreab, F.; Gygi, M. P.; Szpyt, J.; Tam, S.; Zarraga, G.; Colby, G.; Baltier, K.; Dong, R.; Guarani, V.; Vaites, L. P.; Ordureau, A.; Rad, R.; Erickson, B. K.; Wuhr, M.; Chick, J.; Zhai, B.; Kolippakkam, D.; Mintseris, J.; Obar, R. A.; Harris, T.; Artavanis-Tsakonas, S.; Sowa, M. E.; De Camilli, P.; Paulo, J. A.; Harper, J. W.; Gygi, S. P., The BioPlex Network: A Systematic Exploration of the Human Interactome. Cell 2015, 162 (2), 425-40.
    [3]. Collins, B. C.; Gillet, L. C.; Rosenberger, G.; Rost, H. L.; Vichalkovski, A.; Gstaiger, M.; Aebersold, R., Quantifying protein interaction dynamics by SWATH mass spectrometry: application to the 14-3-3 system. Nat Meth 2013, 10 (12), 1246-1253.




  •        使用亲和标签(AP-MS) 或特异性抗体 (CoIP-MS),在native条件下纯化与目标蛋白质相互作用的蛋白,进而使用质谱进行鉴定,通过test\control比对,过滤非特异结合蛋白,定性定量分析与特定蛋白质直接或间接作用的蛋白质。同时,结合 LFQ/TMT等定量技术,可以方便的研究特定蛋白互作关系随时间的变化情况。

                            

    图2:AP-MS 技术实验原理。


  • 1. 哈佛大学Steven P. Gygi教授实验室运用高通量AP-MS技术,进行了2594组AP-MS实验,鉴定了23744个相互作用,包括了7668个蛋白质,为研究蛋白尤其是功能未知蛋白提供了重要参考意义。

             

    图3:高通量AP-MS技术




    2. 为了更好的了解生物学过程的内在动态变化情况,苏黎世联邦理工学院的Ruedi Aebersold教授实验室运用AP-MS技术研究了14-3-3b scaffold protein 的蛋白互作组在IGF1刺激下,insulin-PI3K-AKT信号通路随时间的动态变化过程。[3]

     

    图4:运用AP-MS研究14-3-3 scaffold protein 互作蛋白的时间动态关系,发现5种不同的cluster模式,对研究该信号通路的动态变化过程具有重大指导意义。



  • Sample Amount Antibody
    Tissue
    200 mg
    Yes
    Cell
    2×107
    Yes
    Cell (tag)
    2×107
    No